Медиаторный биосенсор на основе дрожжевых клеток Debaryomyces hansenii для определения бпк 5



страница4/6
Дата09.01.2018
Размер0.54 Mb.
Название файлафх. курсач.docx
ТипРеферат
1   2   3   4   5   6
D. hansenii

Тионин

0,19

Данная работа

D. hansenii

Метиленовый синий

0,15

То же

D. hansenii

Нейтральный красный

0,57

То же

D. hansenii

2,6-

Дихлорфенолиндофенол



0,05

То же

G. oxydans

Тионин

0,03

То же

G. oxydans

Метиленовый синий

0,2

То же

G.oxydans

Нейтральный красный

0,17

То же

G.oxydans

2,6-

Дихлорфенолиндофенол



0,38

То же

Azotobacter chroococcum

Тионин

28,7

[11]

Bacillus subtilis

Метиленовый синий

1,91

[11]

Bacillus subtilis

Тионин

18,0

[11]

Proteus vulgaris

Бриллиантовый крезоловый синий

1,03

[11]

Pseudomonas putida

Метиленовый голубой

0,43

[11]

Proteus vulgaris

Сафранин

0,07

[11]

Таким образом, скорости восстановления медиатора существенно различается для разных типов микроорганизмов и медиаторов, что может сказаться на эффективности работы медиаторного биосенсора.



Следующим этапом исследования было установление кинетических параметров реакции восстановления естественного акцептора электронов - кислорода клетками D. hansenii и G. oxydans в присутствии глюкозы. Вследствие того, что измерение начальной скорости окисления субстрата при различной концентрации кислорода затруднено, расчет кинетических параметров был сделан из одной кинетической кривой, представленной на рис. 2.4.

Рисунок 2.4. Кинетическая кривая потребления кислорода: а - дрожжами D. hansenii (концентрация клеток 4,2 г/дм3, концентрация глюкозы в кювете 33 мМ); б - бактериями G. oxydans (концентрация клеток 2,5 г/дм3, концентрация глюкозы в кювете 33 мМ)


Концентрация кислорода практически линейно снижается в течение первых 7-10 минут после добавления глюкозы как при использовании дрожжевых клеток, так и при использовании бактериальных, что соответствует кинетике реакции нулевого порядка (концентрация кислорода не влияет на скорость окисления субстрата). Если перестроить полученные кинетические кривые в координатах логарифм скорости (lgR) от логарифма концентрации (lgC), то можно убедиться, что получаемые кривые параллельны оси абсцисс (для дрожжей lgR=-16,2±0,1; а для бактерий lgR=-18,8±0,2), что также подтверждает нулевой порядок реакции (метод Вант-Гоффа). Аппроксимация экспериментальных кривых в данном интервале времени уравнением линейной регрессии позволяет определить константу скорости и начальную скорость восстановления кислорода. Таким образом, константа скорости восстановления кислорода для дрожжей D. hansenii составляет 0,84±0,08 мкмоль/(л×с), а скорость восстановления кислорода 0,20±0,05 мкмоль/(г×с), а для бактерий G. oxydans константа скорости и скорость восстановления кислорода равняется 0,034±0,001 мкмоль/(л×с) и 0,013±0,002 мкмоль/(г×с), соответственно.

Для установления конкуренции между кислородом и медиатором сравнивали относительные скорости восстановления акцепторов электронов изучаемыми клетками. В табл. 5 сведены скорости восстановления медиаторов и кислорода для дрожжей D. hansenii и бактерий G. oxydans с учетом того, что при восстановлении молекула кислорода принимает 4 электрона, а изучаемые медиаторы 2 электрона [11].


Таблица 2.3. Сводная таблица относительных скоростей потребления кислорода и восстановления медиаторов используемыми микроорганизмами

Акцептор электронов



Скорость восстановления с учетом количества электронов (без учета количества электронов), мкмоль/(л×с)

Дрожжи D. hansenii

Бактерии G. oxydans

Кислород

0,05 (0,20)

0,003 (0,013)

Тионин

0,09 (0,19)

0,015 (0,03)

Метиленовый синий

0,07 (0,15)

0,1 (0,2)

Нейтральный красный

0,28 (0,57)

0,085 (0,17)

2,6-Дихлорфенолиндофенол

0,025 (0,05)

0,19 (0,38)

Относительная скорость восстановления медиаторов в большинстве случаев превышает относительную скорость потребления кислорода. Таким образом, можно сделать вывод об отсутствие конкуренции кислорода и медиатора. Вероятно, это связано с тем, что перенос электронов на медиатор протекает на стадии, предшествующей лимитирующей стадии при восстановлении кислорода или восстановление медиатора не спарено с синтезом АТФ [11].






Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5   6


База данных защищена авторским правом ©coolnew.ru 2019
обратиться к администрации

    Главная страница
Контрольная работа
Курсовая работа
Теоретические основы
Лабораторная работа
Методические указания
Общая характеристика
Рабочая программа
Теоретические аспекты
Методические рекомендации
Пояснительная записка
Практическая работа
Дипломная работа
Федеральное государственное
История развития
Общие сведения
Учебное пособие
Основная часть
Физическая культура
Теоретическая часть
Направление подготовки
государственное бюджетное
Самостоятельная работа
История возникновения
Практическое задание
Методическая разработка
Краткая характеристика
Выпускная квалификационная
квалификационная работа
бюджетное учреждение
Название дисциплины
государственное образовательное
Гражданское право
Российская академия
Общие положения
образовательное бюджетное
Уголовное право
образовательная организация
история возникновения
Общая часть
теоретические основы
Понятие сущность
Современное состояние
прохождении учебной
Фамилия студента
Правовое регулирование
Техническое задание
Методическое пособие
Финансовое право
Финансовое планирование
Физические основы
Технология производства